MIA PaCa-2 胰腺癌細胞系

背景：

     胰腺癌是第四大致死性腫瘤，預(yù)計2030年將位居第二。基于是否可切除，非轉(zhuǎn)移性胰腺癌患者分為三類：1）可切除2）可能切除3）局部進展。根據(jù)目前NCCN和ASCO的指南推薦，患者處于可切除狀態(tài)且無顯著升高的CA-19-9、大的原位腫瘤、局部大淋巴結(jié)或極其疼痛，應(yīng)在吉西他濱+卡培他濱或FOLFIRIN OX（5-FU、亞葉酸、奧沙利鉑和伊立替康）治療后直接手術(shù)。輔助治療的作用仍不清楚，但邊緣陽性切除尤應(yīng)考慮采用輔助治療。FOLFIRINOX是目前可能切除或局部進展的優(yōu)選新輔助治療方案。臨床研究持續(xù)關(guān)注可切除腫瘤患者是否應(yīng)接受術(shù)前。我們比較了改良FOLFIRINOX（mFOLFIRINOX）新輔助治療與吉西他濱輔助治療（adj-gem）對行切除的胰腺癌患者的臨床轉(zhuǎn)歸與病理標志。

方法：

本研究回顧性入組了2006年至2017年俄亥俄州立大學(xué)患者。雖然認為接受吉西他濱輔助治療的患者可以通過切除，但機構(gòu)腫瘤委員會小組規(guī)定，接受neo-mFOLFIRINOX治療的患者分為可切除性（BR）或不可切除性（UR）胰腺癌患者。111例患者接受了adj-gem（平均周期為5.5），52例患者接受了neo-mFOLFIRINOX治療（平均周期為3.5）。采用Kaplan-Meier模型法計算各自生存率，并用Cox回歸及l(fā)og-rank檢驗進行了分析。

結(jié)果：

      中位隨訪時間為21.3個月時，neo-mFOLFIRINOX組和adj-gem 組的中位OS分別為 35.4個月和21.8個月（HR 0.56，95% CI，0.37-0.84，p = 0.005）。neo-mFOLFIRINOX組和吉西他濱輔助治療組的3年OS率分別為46%和 22%（p = 0.001）。neo-mFOLFIRINOX組和adj-gem組的中位無疾病生存期（DFS）分別為18.6個月和12.0個月（HR 0.63，95%CI，0.43-0.93，p = 0.022）。neo-mFOLFIRINOX組和adj-gem組的3年DFS率分別為17%和11%（p = 0.02）。在手術(shù)病理標本復(fù)查時，與adj-gem組相比，neo-mFOLFIRINOX組具有較低的腫瘤等級、神經(jīng)浸潤和淋巴管浸潤率、病理T分期、病理N分期和較少的陽性淋巴結(jié)數(shù)量，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p < 0.05）。neo-mFOLFIRINOX組中R0切除率比adj-gem組高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（51.9%與40.4，p = 0.2）。兩組之間的平均年齡和體能狀態(tài)相似。

PC-12(高分化)   大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤分化細胞株

PECA 小鼠皮膚鱗狀細胞癌

PH 成人急性單核細胞白血病

PK-15 豬腎細胞

Raji 人B淋巴瘤細胞

RAW264.7   小鼠單核細胞

RSC96 大鼠雪旺細胞

Saos-2 人成骨肉瘤細胞

SCL-1 人皮膚鱗癌細胞

SK-BR-3 人乳腺癌傳代細胞

SK-OV-3 人卵巢癌細胞

SMMC-7721 人肝癌細胞

SNU-899 上呼吸消化道鱗狀細胞癌

SPEC-2 子宮內(nèi)膜漿液性表面乳頭狀癌細胞

ST 豬胎睪丸細胞

SU-DHL-6 彌漫性大B細胞淋巴瘤生發(fā)中心B細胞型

SV40 MES 13 小鼠腎小球系膜細胞

SV-HUC-1 人正常膀胱上皮細胞

SW480   人結(jié)直腸癌細胞

SW620 人結(jié)腸腺癌細胞

SW900 肺鱗狀細胞癌

T24   人膀胱移行細胞癌細胞

TE-1 人食管癌細胞

THP-1 人急性單核細胞白血病單核細胞株

TM3 小鼠睪丸間質(zhì)細胞

TPC-1 人甲狀腺乳頭狀癌的細胞系

U118MG 人星形膠質(zhì)細胞

U266 人骨髓瘤細胞

U87MG  人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤

WiDr 人大腸癌細胞

Yac-1 小鼠淋巴瘤細胞

山羊MSC細胞 山羊骨髓間充質(zhì)干細胞

山羊關(guān)節(jié)軟骨細胞

MIA PaCa-2 胰腺癌細胞系

原代培養(yǎng)及其操作步驟

原代分離細胞培養(yǎng)是指從供體內(nèi)取出組織后，經(jīng)機械以及消化分離成單個細胞或單一型細胞群，使之在體外模擬人體生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度和一定的營養(yǎng)條件下，生存、生長和繁殖。原代培養(yǎng)細胞常有不同的細胞成分，生長緩慢，但是更能代表所來源的組織細胞類型和表達組織的特異性特征。利用原代細胞培養(yǎng)做各種實驗，如藥物測試、細胞分化及病毒學(xué)方面的試驗效果很好。其操作步驟如下。

1、剪切組織：先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術(shù)去除黏附的結(jié)締組織等非培養(yǎng)所需組織。再次清洗后，用刀將組織切成若干小塊，移入青霉素小瓶或小燒杯中，加入適量緩沖液，用彎頭眼科剪，反復(fù)剪切組織，直到組織成糊狀，約1mm3大小。靜置片刻后，用吸管吸去上層液體，加入適當(dāng)?shù)木彌_液再清洗一次。

2、消化分離：消化分離的目的是將細小的組織塊消化分離成細胞團或分散的單個細胞，以利于進一步的培養(yǎng)，常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。

3、培養(yǎng)：細胞懸液用計數(shù)板進行細胞計數(shù)。用培養(yǎng)液將細胞數(shù)調(diào)整為（2～5）×105 cells／ml，或?qū)嶒炈杳芏?，分裝于培養(yǎng)瓶中，使細胞懸液的量以覆蓋后略高于培養(yǎng)瓶底部為宜。置CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，5％CO2，37℃靜置培養(yǎng)。一般3～5d，原代培養(yǎng)細胞可以黏附于瓶壁，并伸展開始生長，可補加原培養(yǎng)液量1／2的新培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3d后換液，一般7～14d可以長滿瓶壁，進行傳代。

4、注意事項：

1）無菌操作：細菌或霉菌污染是培養(yǎng)失敗的常見原因，必須加強各個環(huán)節(jié)的無菌操作觀念，以預(yù)防為主，一旦污染，一般很難消除。

（2）培養(yǎng)液：所用的培養(yǎng)液必須滿足細胞生存和生長的必要條件。由于細胞來源的動物種類、組織類型不同，對培養(yǎng)液的要求有一定的差異，必要時可用預(yù)實驗的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）小牛血清：小牛血清對于維持培養(yǎng)細胞的生存和促進細胞增殖起著關(guān)鍵性作用。可選擇多種不同批號的小牛血清進行小樣分析。一旦確定某一廠家的某一批號小牛血清后，就保持應(yīng)用至實驗完成。

（4）膠原酶溶液：必須新鮮配制，貯存時間過長(即使是-20℃低溫保存)，也將影響消化效力，導(dǎo)致消化時間過長，細胞損傷增加。

（5）L-谷氨酰胺：幾乎所有細胞對谷氨酰胺都有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時，細胞會因生長不良而死亡。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，加有谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱貯存兩周以上時，就應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。

（6）靜置培養(yǎng)：原代細胞在消化分離后，置于CO2培養(yǎng)箱的頭24～48h (必要時72h)內(nèi)，應(yīng)處于絕對靜置狀態(tài)，切忌不時地取出培養(yǎng)瓶觀察生長狀況，這將使原代分離細胞難以貼壁，更談不上伸展和增殖，初學(xué)者尤應(yīng)注意。不必擔(dān)心培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分會消耗光，在細胞增殖之前對營養(yǎng)的要求并不大。原代培養(yǎng)初期僅加一薄層培養(yǎng)液的目的也在于有利于細胞貼壁伸展。

（7）消化時間：一般消化至肉眼尚可見微小組織顆粒即可，因為此時組織顆粒已經(jīng)松散，略經(jīng)吹打即成細胞團或單個細胞，過久的消化往往導(dǎo)致細胞損傷加重，細胞培養(yǎng)成活率降低。

（8）其他生長因子：經(jīng)過以上處理，一般原代分離細胞培養(yǎng)均可以成功。對于少數(shù)特殊類型細胞也可以考慮加一些特殊的生長因子，如胰島素能促使細胞攝取葡萄糖和氨基酸。另外，內(nèi)毒素、EGF、FGF等均有促有絲分裂作用，但費用較高。