細胞培養(yǎng)過程中應(yīng)該注意哪些問題？

#1細胞培養(yǎng)步驟一般包括：解凍、培養(yǎng)、分盤、凍存?；旧隙甲裱@個步驟，細胞轉(zhuǎn)染過程，我們往往發(fā)生在步驟3，在做細胞功能性實驗時，往往在步驟2，解凍和凍存就是細胞的儲藏和分離的過程。

#2首先我們要獲得細胞，一般受大家比較認(rèn)可的細胞庫有1962年ATCC建立的CELL LINES、中科院、DSMZ等機構(gòu)。

#3細胞解凍要求37度快速解凍，另外就是注意不同細胞的培養(yǎng)條件。

#4同規(guī)格培養(yǎng)器皿所需要的細胞生長密度也不同，如下圖：

#5細胞生長會產(chǎn)生各種代謝廢物，造成培養(yǎng)液PH變化，所以培養(yǎng)過程中，遇到細胞培養(yǎng)液變化較為明顯時，要及時更換培養(yǎng)液，保證細胞的正常生長。

#6細胞離心時也要注意，強烈的離心力會使得細胞大量積聚離心管底部，造成大量細胞擠壓破碎，一般不要超過300g，5-10min即可。

#7此外離心機分為固定轉(zhuǎn)角離心機和自由轉(zhuǎn)角離心機，固定轉(zhuǎn)角的離心機會使細胞堆積在側(cè)壁，容易造成一些細胞離心不充分，造成細胞的丟失，相反，自由轉(zhuǎn)角離心機能很好解決這個問題所以，我們一般盡量使用自由轉(zhuǎn)角離心機。

1、細胞系（細胞株）

細胞系是來自多細胞生物體的細胞群體，其通常不會無限增殖，但是由于突變，逃避了正常細胞的衰老，從而可以持續(xù)分裂的一種細胞的集合。

因此，細胞可以在體外長時間生長。細胞系是研究多細胞生物體的生物化學(xué)和細胞生物學(xué)的非常重要的工具，例如信號通路、腫瘤殺傷、細胞增殖、細胞周期、突變分析、基因表達、蛋白表達、細胞分化等等。此外，永生化的細胞系也已經(jīng)在生物技術(shù)中得到應(yīng)用，比如建立新來源、新突變的細胞系。

2、克隆細胞株

從一個經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細胞系用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群，稱細胞株。再由原細胞株進一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細胞群，亦可稱之為亞株。

3、二倍體細胞

細胞群染色體數(shù)目具有與原供體二倍細胞染色體數(shù)相同或基本相同（ 2n 細胞占 75%或 80%以上）的細胞群，稱二倍體細胞培養(yǎng)。如僅數(shù)目相同，而核型不同的即染色體形態(tài)有改變者為假二倍體。二倍體細胞在正常情況下具有限生命期，故屬有限細胞系。

但隨供體年齡和組織細胞的不同，二倍體細胞的壽命長短各異。人胚肺成纖維細胞可傳50代±10代，人胚腎只有8—10代，人胚神經(jīng)膠質(zhì)細胞15—30 代；如從老齡個體取材培養(yǎng)，則細胞生存期更短。由不同年齡供體取材建立的二倍體細胞系可供研究衰老之用。為保持二倍體細胞能長期被利用，一般在初代或 2— 5 代即大量凍存作為原種，用時再進行增殖培養(yǎng)，用后再繼續(xù)凍存，可供長期使用和延緩細胞的衰老。

4、初代培養(yǎng)（原代細胞培養(yǎng)）

原代培養(yǎng)是從供體獲取組織后的第一次培養(yǎng)，其優(yōu)點是：組織和細胞剛剛離體，生物性狀尚未發(fā)生很大的變化，具有二倍體遺傳性狀，在供體來源充分、生物條件穩(wěn)定的情況下（年齡、性別），在一定程度上能反映體內(nèi)狀態(tài)。原代培養(yǎng)所在機能上的改變，主要是表型上的改變，不一定為體細胞突變。從理論上講，人們有可能創(chuàng)造出一種條件，使原代培養(yǎng)細胞恢復(fù)體內(nèi)時的機能，因此原代培養(yǎng)細胞是研究基因表達的理想系統(tǒng)。采用原代培養(yǎng)細胞做實驗，如藥物測試等效果也很好；原代培養(yǎng)也是建立各種細胞系（株）必須經(jīng)過的階段。有一點也要注意到，原代培養(yǎng)的組織是由多種細胞成分組成的，比較復(fù)雜。

即使培養(yǎng)的是較純的單一類型的細胞，如上皮或成纖維細胞，也仍存在著異質(zhì)性，在分析細胞生物學(xué)特性時仍有一定困難。此外由于不同供體不同批次差異及其它一些原因，細胞生長效果有時也會不一致。

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