產(chǎn)品名稱：小鼠骨髓性白血病細(xì)胞M-NFS-60    

細(xì)胞規(guī)格：1-3×10^6細(xì)胞量

庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨

培養(yǎng)液：1640+10%fbs+62 ng/ml M-CSF+0.05mM2-巰基乙醇

運(yùn)輸方式：常溫順豐運(yùn)輸和干冰順豐運(yùn)輸

貨 期：復(fù)蘇細(xì)胞需要1-2周，凍存細(xì)胞的需要3-5天（特殊情況會(huì)有說明）

質(zhì) 控：無支原體、無污染、符合標(biāo)準(zhǔn)

研究范圍：僅供科研使用

小鼠骨髓性白血病細(xì)胞M-NFS-60     

我司主要經(jīng)營(yíng)產(chǎn)品是國(guó)內(nèi)傳代細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的生物試劑。GIBCO、HyClone、NTC、SIGMA、 BI 、GEMINI、PAN和SBI無外泌體血清等高品質(zhì)血清。常規(guī)液體培養(yǎng)基、胰酶、雙抗、無血清凍存液、日本三菱產(chǎn)品、ELISA 試劑盒等產(chǎn)品。售后完善，我們以飽滿的熱情歡迎新老客戶選購(gòu)！

我司以客戶為核心，以產(chǎn)品質(zhì)量求生存，以售后服務(wù)求信譽(yù)。我們通過不斷改進(jìn)來提高效率，絕不以犧牲品質(zhì)作為代價(jià)。“誠(chéng)信、創(chuàng)新、嚴(yán)謹(jǐn)、專業(yè)”愿以飽滿的熱情期待各界朋友攜手合作，共創(chuàng)輝煌！

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1. 剪切組織　先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術(shù)鑷去除黏附的結(jié)締組織等非培養(yǎng)所需組織。再次清洗后，用手術(shù)刀將組織切成若干小塊，移入青霉素小瓶或小燒杯中，加入適量緩沖液，用彎頭眼科剪，反復(fù)剪切組織，直到組織成糊狀，約1mm³大小。靜置片刻后，用吸管吸去上層液體，加入適當(dāng)?shù)木彌_液再清洗一次。

2. 消化分離　消化分離的目的是將細(xì)小的組織塊消化分離成細(xì)胞團(tuán)或分散的單個(gè)細(xì)胞，以利于進(jìn)一步的培養(yǎng)，常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。

3. 培養(yǎng)　細(xì)胞懸液用計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。用培養(yǎng)液將細(xì)胞數(shù)調(diào)整為（2～5）×10⁵ 細(xì)胞／毫升，或?qū)嶒?yàn)所需密度，分裝于培養(yǎng)瓶中，使細(xì)胞懸液的量以覆蓋后略高于培養(yǎng)瓶底部為宜。置CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，5％CO2，37℃靜置培養(yǎng)。一般3～5d，原代培養(yǎng)細(xì)胞可以黏附于瓶壁，并伸展開始生長(zhǎng)，可補(bǔ)加原培養(yǎng)液量1／2的新培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3d后換液，一般7～14d可以長(zhǎng)滿瓶壁，進(jìn)行傳代。

細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

（1）無菌操作：細(xì)菌或霉菌污染是培養(yǎng)失敗的常見原因，必須加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的無菌操作觀念，以預(yù)防為主，一旦污染，一般很難消除。

（2）培養(yǎng)液：所用的培養(yǎng)液必須滿足細(xì)胞生存和生長(zhǎng)的必要條件。由于細(xì)胞來源的動(dòng)物種類、組織類型不同，對(duì)培養(yǎng)液的要求有一定的差異，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）血清：血清對(duì)于維持培養(yǎng)細(xì)胞的生存和促進(jìn)細(xì)胞增殖起著關(guān)鍵性作用。可選擇多種不同批號(hào)的血清進(jìn)行小樣分析。一旦確定某一廠家的某一批號(hào)血清后，就保持應(yīng)用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）膠原酶溶液：必須新鮮配制，貯存時(shí)間過長(zhǎng)(即使是-20℃低溫保存)，也將影響消化效力，導(dǎo)致消化時(shí)間過長(zhǎng)，細(xì)胞損傷增加。

（5）L-谷氨酰胺：幾乎所有細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺都有較高的要求，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞會(huì)因生長(zhǎng)不良而死亡。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，加有谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱貯存兩周以上時(shí)，就應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。

（6）靜置培養(yǎng)：原代細(xì)胞在消化分離后，置于CO2培養(yǎng)箱的頭24～48h (必要時(shí)72h)內(nèi)，應(yīng)處于靜置狀態(tài)，切忌不時(shí)地取出培養(yǎng)瓶觀察生長(zhǎng)狀況，這將使原代分離細(xì)胞難以貼壁，更談不上伸展和增殖，初學(xué)者尤應(yīng)注意。不必?fù)?dān)心培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)消耗光，在細(xì)胞增殖之前對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求并不大。原代培養(yǎng)初期僅加一薄層培養(yǎng)液的目的也在于有利于細(xì)胞貼壁伸展。

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中*的除了培養(yǎng)基，胰酶也是非常重要的一個(gè)角色，雖然細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)基本技術(shù)大同小異，每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件各不相同，但是，在細(xì)胞傳代過程中都少不了這個(gè)步驟—胰酶消化。

細(xì)胞培養(yǎng)過程中為什么要使用胰酶呢？胰酶的作用是什么？

胰酶是一種蛋白酶，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時(shí)，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。

使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，在使用胰酶消化時(shí)發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過程，這是什么原因？

血清終止的原理其實(shí)是競(jìng)爭(zhēng)抑制，就是用過量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合，使胰酶失去消化細(xì)胞蛋白的機(jī)會(huì)。

為什么使用了胰蛋白酶消化，細(xì)胞還是成團(tuán)的，這可能是什么原因?qū)е碌模?/span>

消化時(shí)間不夠 ② 吹打力度不夠 ③ 胰酶消化液濃度不夠 ④ 細(xì)胞密度過高之后才消化傳代 ⑤ 胰酶存儲(chǔ)不當(dāng)，或者使用了過期胰酶

胰酶分裝凍存時(shí)要注意什么？

胰酶分裝時(shí)盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因?yàn)槔鋬霰４鏁r(shí)體積會(huì)膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會(huì)降低消化效果并增大污染的可能性。

怎么才能判斷胰酶消化*？

注意：不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才表示消化好了。

一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙狀移動(dòng)就可以了，就應(yīng)該停止消化。

胰酶適用于哪些細(xì)胞消化？它的消化效果與哪些有關(guān)呢？

胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對(duì)纖維性組織和較硬的癌組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。

胰酶中的酚紅有哪些作用？

酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH指示劑，中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。研究表明：酚紅可以模擬固醇類激素（特別是雌激素）的作用。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí)，建議用不含酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè)，在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)，也會(huì)使用不含酚紅的培養(yǎng)基或者胰酶。

在做細(xì)胞凋亡檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞為什么不能用含有EDTA的胰酶消化？

Annexin V（膜聯(lián)蛋白）是Ca2+依賴的蛋白，EDTA會(huì)螯合Ca2+從而影響Annexin V，進(jìn)而影響結(jié)果，因此需選用不含EDTA的胰酶。建議放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行消化，時(shí)間可以長(zhǎng)一點(diǎn)。隨時(shí)觀察細(xì)胞情況，避免消化過度；也可使用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下，后用槍吹勻，比消化簡(jiǎn)單，還可避免使用胰酶帶來的傷害。

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株

HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

LOVO/5-FU 人結(jié)腸癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

HCT116/L人結(jié)腸癌奧沙利鉑耐藥細(xì)胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病細(xì)胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌細(xì)胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人結(jié)腸癌細(xì)胞阿霉素耐藥株

HNE1/DDP人鼻咽癌細(xì)胞順鉑耐藥株

SGC7901/5-fu人胃癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

A549/DDP人肺癌細(xì)胞順鉑耐藥株

MCF-7/DDP人乳腺癌細(xì)胞順鉑耐藥株

A549/ADR人肺癌細(xì)胞阿霉素耐藥株

SGC7901/DDP人胃癌細(xì)胞順鉑耐藥株

SKOV3/DDP人卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥株

HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細(xì)胞株

3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

NIH/3T3小鼠胚胎細(xì)胞

Raw264.7小鼠單核巨噬白血病細(xì)胞

B16-F10小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)細(xì)胞

B16 小鼠黑色素瘤細(xì)胞

CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞

SV40 MES 13小鼠腎小球系膜細(xì)胞

F9 小鼠畸胎瘤細(xì)胞

MLE-12 小鼠肺泡上皮細(xì)胞

Sp2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤細(xì)胞

BV2 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞  

DC2.4小鼠樹突狀細(xì)胞

U14 小鼠子宮頸癌細(xì)胞

M-NFS-60小鼠骨髓性白血病細(xì)胞

mMSC小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

HL-1小鼠心肌細(xì)胞

TM3 小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞

k7m2.wt小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞

mc3t3 e1小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞

hepa1-6 小鼠肝癌細(xì)胞

SP2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞

HT22小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系

MC38小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞

mpc5小鼠足細(xì)胞

4T1 小鼠乳腺癌細(xì)胞

ANA-1小鼠巨噬細(xì)胞

TM4 小鼠睪丸支持細(xì)胞

STO 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

bend.3 小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞

H9C2 大鼠心肌細(xì)胞

PC-12(低分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化)

PC-12(高分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化)

AR42J 大鼠胰腺外分泌細(xì)胞

IEC-6 大鼠小腸引窩上皮細(xì)胞

RT4-D6P2T 大鼠神經(jīng)鞘瘤細(xì)胞

INS-1 大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞

NRK-52E 大鼠腎小管導(dǎo)管上皮細(xì)胞

BHK-21 倉(cāng)鼠腎成纖維細(xì)胞

PK-15 豬腎細(xì)胞

Duckembyro 鴨胚胎成纖維細(xì)胞

vero 綠猴腎細(xì)胞

Hep3B人肝癌細(xì)胞

HPAC人胰腺癌細(xì)胞

HT-1376 人膀胱癌細(xì)胞

JAR 人胎盤絨毛癌細(xì)胞

KNS-89 人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞

LN229 人膠質(zhì)瘤細(xì)胞

LNCaP clone FGC 人前列腺癌細(xì)胞

MDA-KB2 人乳腺細(xì)胞

MDA-MB-361 人乳腺癌細(xì)胞

MET-5A 人膜間皮細(xì)胞

MGC-803 人胃癌細(xì)胞

NCI-H1650 人肺支氣管癌細(xì)胞

RT4 人膀胱移行細(xì)胞乳頭瘤

SK-N-MC 人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞

SK-N-SH 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

SW982 人滑膜肉瘤細(xì)胞

T98G 人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤

U251MG(KO) 人類星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞

U266 人骨髓瘤細(xì)胞

VCAP 人前列腺癌細(xì)胞

hTERT-HPNE 人胰腺導(dǎo)管細(xì)胞

ES-2 人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞

NCI-H1650人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

H460 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞

HACAT 人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞

HCT116 人結(jié)腸癌細(xì)胞

HEK293 人胚腎細(xì)胞

HEPG2 人肝癌細(xì)胞

HGC27 人胃癌細(xì)胞(未分化)

HT-29 人結(jié)腸癌細(xì)胞

HUVEC 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

KYSE150人食道癌細(xì)胞

L02(HL7702)人正常肝細(xì)胞  

LOVO 人結(jié)腸癌細(xì)胞

MCF-10A人正常乳腺上皮細(xì)胞

MCF7人乳腺癌細(xì)胞

LX-2 人肝星狀細(xì)胞

MDA-MB-468人乳腺癌細(xì)胞

Hyclone胎牛血清 Sv30087.01

Hyclone胎牛血清 Sv30087.02

Hyclone胎牛血清 SH30084.03

Hyclone優(yōu)等胎牛血清 SH30406.02

Hyclone優(yōu)等胎牛血清 SH30406.05

Hyclone特級(jí)胎牛血清 SH30396.03

Hyclone特級(jí)胎牛血清 SH30070.03

Hyclone特級(jí)胎牛血清 SH30070.03E

Hyclone胎牛血清 SH30370.03

活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03

活性炭/葡聚糖處理胎牛血清，熱滅活 SH30068.03HI

馬血清SH30074.03

烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03

Hyclone胎牛血清SH30071.03

Hyclone胎牛血清SV30160.03

胎牛血清FBS SFBS

新生牛血清 SNCS

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101

PAA 優(yōu)等胎牛血清FBS A15-151

BI優(yōu)等胎牛血清 04-001-1ACS

BI ES級(jí)別胎牛血清 04-002-1A

BI 間充質(zhì)胎牛血清 04-400-1A

Corning胎牛血清 35-076-CV

PAN胎牛血清FBS P30-3302

PAN胎牛血清FBS ST30-3302

PAN ES級(jí)別胎牛血清 ST30-2602

PAN胎牛血清FBS Plus ST30-3302P

NTC優(yōu)等胎牛血清 SFBE

Gemini優(yōu)等胎牛血清 900-108

Gemini特級(jí)胎牛血清 100-500

Gemini科研用人AB血清100-512

TCB胎牛血清 101ZC

Sigma 特級(jí)胎牛血清 F2442

Sigma正常人AB血清 H4522

SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1

胎牛血清10270106、10099-141、10091-148、10099-133、10100-147、16010159、A31608-02、16050-122、30067334、10437-028等優(yōu)質(zhì)胎牛血清

雙抗 15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

DMEM高糖培養(yǎng)基 C11995500BT

DMEM低糖培養(yǎng)基 C11885500BT

PBS C10010500BT

1640培養(yǎng)基 C11875500BT

DMEM/F12 C11330500BT

MEM培養(yǎng)基 C11095500BT

α-MEM C12571500BT

DMEM低糖 SH30021.01

DMEM高糖 SH30022.01、SH30243.01

DMEM/F-12 1:1 SH30023.01

MEM/EBSS SH30024.01

PBS緩沖液 SH30256.01

α-MEM SH30265.01

RPMI-1640 SH30809.01

DPBS SH30028.02