產(chǎn)品名稱：特惠產(chǎn)品小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞bend.3  

貨號：QS-M029

細(xì)胞規(guī)格：1-3×10^6細(xì)胞量

庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨

培養(yǎng)液：DMEM+10% FBS

凍存條件：80%*培養(yǎng)液+10%FBS+10%DMSO

運輸方式：常溫順豐運輸和干冰順豐運輸

貨 期：復(fù)蘇細(xì)胞需要1-2周，凍存細(xì)胞的需要3-5天（特殊情況會有說明）

質(zhì) 控：無支原體、無污染、符合標(biāo)準(zhǔn)

研究范圍：僅供科研使用

特惠產(chǎn)品小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞bend.3  

我司主要經(jīng)營產(chǎn)品是國內(nèi)傳代細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的生物試劑。GIBCO、HyClone、NTC、SIGMA、 BI 、GEMINI、PAN和SBI無外泌體血清等高品質(zhì)血清。常規(guī)液體培養(yǎng)基、胰酶、雙抗、無血清凍存液、日本三菱產(chǎn)品、ELISA 試劑盒等產(chǎn)品。售后完善，我們以飽滿的熱情歡迎新老客戶選購！

我司以客戶為核心，以產(chǎn)品質(zhì)量求生存，以售后服務(wù)求信譽。我們通過不斷改進來提高效率，絕不以犧牲品質(zhì)作為代價。“誠信、創(chuàng)新、嚴(yán)謹(jǐn)、專業(yè)”愿以飽滿的熱情期待各界朋友攜手合作，共創(chuàng)輝煌！

生物反應(yīng)器在生物制藥領(lǐng)域的研發(fā)和生產(chǎn)中大量應(yīng)用。但是哺乳動物細(xì)胞對于周邊的環(huán)境非常敏感，較容易受到通氣，轉(zhuǎn)速，營養(yǎng)成分及 pH 等多種因素的影響。在本文中，我們簡單介紹了影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素之一—混合時間及其檢測衡量方法。

1.細(xì)胞培養(yǎng)平行性放大的簡單原理

為了快速、穩(wěn)定的實現(xiàn)單抗、疫苗的工業(yè)化生產(chǎn)，其中一部分工作在于對哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)進行放大研究。這種研究可以幫助我們從搖瓶至 2000 L 乃至更大規(guī)模的生物反應(yīng)器培養(yǎng)過程中節(jié)省成本損耗及人力投入。相比于傳統(tǒng)發(fā)酵業(yè)使用的細(xì)菌而言，哺乳動物細(xì)胞更為脆弱，更易受到流體運動及通氣的損傷。

因此，在大規(guī)模哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，除了*的使用較溫和、剪切力較低的攪拌槳代替?zhèn)鹘y(tǒng)的 Rushton 攪拌槳以外，很多用于衡量流體運動及通氣的模型也幫助大家較快速的實現(xiàn)從小規(guī)模至大規(guī)模哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化。

2. 混合時間

混合時間和攪拌槳的功耗被認(rèn)為是衡量攪拌槳及轉(zhuǎn)速的兩個維度。對于生物反應(yīng)器而言，流體的混合是一個非常重要的參數(shù)，它衡量了反應(yīng)器是否能很好的給活細(xì)胞供給營養(yǎng)成分和氧氣，同時對于剪切力敏感的哺乳動物細(xì)胞，如果攪拌轉(zhuǎn)速過快又會造成很高的剪切力損傷導(dǎo)致細(xì)胞死亡或凋亡。所以如何在一定時間內(nèi)有效溫和的對流體進行混合，從而提供給細(xì)胞一個舒適的環(huán)境，是衡量混合時間的意義。

簡而言之，在放大過程中，如何保證混合時間在一定的范圍內(nèi)，是平行性放大需要考慮的內(nèi)容之一。

混合時間（θm）指的是流體達到均一性所用的時間，是一個非常復(fù)雜的參數(shù)，不僅與攪拌槳葉的設(shè)計，槳葉及軸的傾斜角度，槳葉片數(shù)，罐體的三維參數(shù)都息息相關(guān)，同時也與實驗參數(shù)息息相關(guān)，如培養(yǎng)溫度、通氣情況、功耗等，因此（CFD）建模也經(jīng)常需要矯正存在誤差。所以目前更多的是采用混合時間的實際檢測方法驗證 CFD 模型的優(yōu)劣，從而通過模型模擬大生物反應(yīng)器上細(xì)胞的運行情況。

3.混合時間的檢測方法

3.1直接測量法

對反應(yīng)器特定條件的混合時間的測定可以通過測量液體體系中 pH，電導(dǎo)，顏色，熒光，溫度的均一性來衡量。

假設(shè)用電導(dǎo)或 pH 來測量混合時間，整個測試條件一般用純水或緩沖液代替培養(yǎng)基來降低混合時間測量的成本，這種代替并不會影響混合時間的檢測。

混合時間的測量需要固定溫度，通氣和攪拌速率，并在反應(yīng)器的中部及下部插入相關(guān)電極，通過極短的時間向純水或緩沖液中加入強酸強堿或是強電導(dǎo)溶液（5M NaCl），觀察反應(yīng)器中部及下部電極的波動情況，若波動小于 95% 即意味著達到平衡。

由于電極的擺放位置直接影響了檢測結(jié)果，所以可以在上中下多個部位插入多根電極，以求得到較準(zhǔn)確的混合時間數(shù)據(jù)。

這種檢測方法比較簡單，但也會引入誤差，一是來源于電極的數(shù)據(jù)采集和接受的時間差，二是對于 pH 電極而言，離子擴散需要時間因此也會引入一定的時間誤差。因此，相比于 pH 電極的混合時間檢測方法，電導(dǎo)的檢測方法會更為準(zhǔn)確，pH 電極會產(chǎn)生 5 - 50% 的高估混合時間的現(xiàn)象。同時由于混合時間一般都是在非通氣狀態(tài)下測試的，通氣也會加快或降低混合時間，會引起 ≤ 15% 的系統(tǒng)誤差。

3.2有色試劑法

同樣，我們可以通過有色試劑的混勻情況來衡量混合時間，如酚酞試劑在堿性環(huán)境中呈現(xiàn)紅色，當(dāng)過酸時即會顯現(xiàn)無色。顯色測量混合時間法需要用到呈像記錄儀來幫助我們更準(zhǔn)確的記錄數(shù)據(jù)，呈像記錄儀記錄來自反應(yīng)器上方液體的顏色變化情況和時間。

4. 計算及模型

從小罐至大罐放大的過程中，假設(shè)僅通過計算來衡量罐體運行參數(shù)和計算混合時間會與真實情況存在較大誤差，目前更多的會使用 CFD 模型模擬大罐運行以期在真實生產(chǎn)中摸索出合適穩(wěn)定易行的運行條件，混合時間就是衡量 CFD 模型建立是否能夠?qū)崿F(xiàn)小罐模擬大罐的標(biāo)準(zhǔn)之一。

當(dāng) Re > 10,000，流體的流動狀態(tài)是紊流，現(xiàn)在已經(jīng)有很多已經(jīng)建立好的 CFD 模型可以直接使用；但由于大型生物反應(yīng)器中細(xì)胞對于剪切力的敏感性，轉(zhuǎn)速較低，因此大部分情況下，Re < 10,000，此時需要對目前已有的模型進行修正后才可以使用。

在建模中，我們需要考慮的因素包括：攪拌槳直徑，罐體直徑，攪拌槳底部至罐體底部的距離，罐體高度，攪拌槳葉長度，攪拌槳葉個數(shù)，以及攪拌軸及攪拌槳葉各自的傾斜角度，如果有 2 個攪拌槳，2 個攪拌槳之間的距離也是建模的參數(shù)之一。

如果需要考慮通氣對于混合時間的影響，那么通氣孔徑及通氣量也需要放入建模體系中。目前市面上有不少相關(guān)建模軟件，此處暫不做推薦。

建模完成后，我們可以通過實際的混合時間與建模得到的混合時間進行對比，誤差小于 5% (置信區(qū)間內(nèi)) 即認(rèn)為模型可以衡量大罐的運行參數(shù)。

Hyclone胎牛血清FBS SH30084.03 AUSTRALIA 500ML

Hyclone優(yōu)等胎牛血清FBS SH30406.05 New Zealand 500ML

Hyclone特級胎牛血清FBS SH30396.03 Canada 500ML

Hyclone特級胎牛血清FBS SH30070.03 USA 500ML

Hyclone活性炭/葡聚糖處理 SH30068.03 USA 500ML

Hyclone馬血清      SH30074.03 USA 500ML

Hyclone烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03 Uruguay 500ML

Hyclone標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清  SH30071.03 USA 500ML

Hyclone優(yōu)等胎牛血清  SV30160.03 SOUTH AMERICA 500ML

Hyclone新生牛血清 SH30413.02 New Zealand 500ML

SERANA胎牛血清FBS S-FBS-SA-015 SOUTH AMERICA 500ML

SERANA胎牛血清FBS S-FBS-EU-015 SOUTH AMERICA 500ML

SERANA胎牛血清FBS S-FBS-US-015 USA 500ML

SERANA胎牛血清FBS S-FBS-AU-015 AUSTRALIA 500ML

SERANA超低IgG胎牛血清 S-FBS-SA-055 SOUTH AMERICA 500ML

SERANA透析胎牛血清Dialyzed FBS S-FBS-US-065 USA 500ML

SERANA活性炭/葡聚糖處理 S-FBS-AU-045 AUSTRALIA 500ML

BOVOGEN胎牛血清FBS SFBS SOUTH AMERICA 500ML

BOVOGEN胎牛血清FBS SFBS New Zealand 500ML

BOVOGEN胎牛血清FBS SFBS AUSTRALIA 500ML

BOVOGEN新生牛血清   New Zealand 500ML

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101 EU 500ML

PAA 優(yōu)等胎牛血清FBS A15-151 EU 500ML

BI優(yōu)等胎牛血清 04-001-1ACS SOUTH AMERICA 500ML

BI ES級別胎牛血清 04-002-1A SOUTH AMERICA 500ML

BI 間充質(zhì)干細(xì)胞胎牛血清 04-400-1A SOUTH AMERICA 500ML

Corning康寧優(yōu)等胎牛血清 35-076-CV AUSTRALIA 500ML

PAN胎牛血清FBS P30-3302 SOUTH AMERICA 500ML

PAN胎牛血清FBS ST30-3302 SOUTH AMERICA 500ML

PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602 SOUTH AMERICA 500ML

PAN胎牛血清FBS Plus ST30-3302P SOUTH AMERICA 500ML

NTC優(yōu)等胎牛血清 SFBE 阿根廷 500ML

Gemini優(yōu)等胎牛血清 900-108 SOUTH AMERICA 500ML

Gemini特級胎牛血清 100-500 USA 500ML

Gemini科研用人AB血清 100-512 USA 100ML

TCB胎牛血清 101ZC New Zealand 500ML

Sigma 特級胎牛血清 F2442 USA 500ML

Sigma正常人AB血清 H4522 USA 100ML

SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1 USA 50ML

GIBCO 雙抗 15140-122 100ml

GIBCO 胰酶 25200-056 100ml

GIBCO 胰酶 25200-072 500ml

DMEM高糖培養(yǎng)基 C11995500BT 500ml

DMEM低糖培養(yǎng)基 C11885500BT 500ml

PBS C10010500BT 500ml

1640培養(yǎng)基 C11875500BT 500ml

DMEM/F12 C11330500BT 500ml

MEM C11095500BT 500ml

α-MEM C12571500BT 500ml

HyClone 雙抗 SV30010 100ml

HyClone 胰酶 SH30042.01 100ml

DMEM低糖 SH30021.01 500ml

DMEM高糖（不含丙酮酸鈉） SH30022.01 500ml

DMEM/F-12 1:1 SH30023.01 500ml

MEM/EBSS SH30024.01 500ml

IMDM SH30228.01 500ml

DMEM高糖（含丙酮酸鈉） SH30243.01 500ml

M199/EBSS SH30253.01 500ml

PBS緩沖液 SH30256.01 500ml

α-MEM SH30265.01 500ml

改良型RPMI-1640 SH30809.01 500ml

DPBS SH30028.02 500ml