人惡性黑色素瘤細(xì)胞MeWo培養(yǎng)說明書

簡(jiǎn)介：MeWo細(xì)胞系由Y.Kodera和M.Bean于1974年從淋巴結(jié)組織中建立。 來源于轉(zhuǎn)移部位、淋巴結(jié) 由78隨白人男性捐獻(xiàn)！可以在裸鼠體內(nèi)形成腫瘤。  

貨號(hào)：WS897

規(guī)格：1×10? 細(xì)胞/T25 培養(yǎng)瓶

一、細(xì)胞基本信息

- 細(xì)胞來源：皮膚

- 細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

-傳代比例/細(xì)胞消化：1:2傳代,消化2-3分鐘

- 倍增時(shí)間：每周 2 至 3 次

- 細(xì)胞含量：＞1×10? 細(xì)胞/瓶

- 包裝規(guī)格：T25 培養(yǎng)瓶 / 1mL 凍存管

- 產(chǎn)品用途：僅供科研使用，不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

二、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件

1. 培養(yǎng)基

MEM培養(yǎng)基；10%胎牛血清；1%雙抗。

推薦血清：WinSera FBS500 - WP - 002

2. 培養(yǎng)條件

- 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3. 凍存與儲(chǔ)存

- 凍存液：90%胎牛血清 + 10%DMSO（現(xiàn)配現(xiàn)用）

- 儲(chǔ)存條件：液氮長(zhǎng)期保存

三、運(yùn)輸形式與接收處理

1. 常溫發(fā)貨（T25 瓶活細(xì)胞）

收到細(xì)胞后，先對(duì) T25 培養(yǎng)瓶瓶身進(jìn)行表面消毒；將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱靜置 2 - 3 小時(shí)；觀察細(xì)胞密度與生長(zhǎng)狀態(tài)，拍攝 2 - 3 張清晰照片反饋給銷售；細(xì)胞密度達(dá)標(biāo)即可進(jìn)行傳代，前期傳代比例建議為 1:2；待細(xì)胞再次長(zhǎng)滿后，將其中一整瓶細(xì)胞凍存為 1 支 1mL 凍存管，另一瓶繼續(xù)傳代；建議反復(fù)凍存 2 - 3 支種子細(xì)胞后，再進(jìn)行擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，避免因突發(fā)情況導(dǎo)致細(xì)胞斷種。

備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用于培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議 T25 培養(yǎng)瓶按 1:2 傳代。

2. 干冰發(fā)貨（凍存管細(xì)胞）

常規(guī)發(fā)貨為 2 支凍存管，建議復(fù)蘇 1 支、留存 1 支備用；若支復(fù)蘇失敗，嚴(yán)格按照廠家標(biāo)準(zhǔn)復(fù)蘇流程操作第二支；若兩支均復(fù)蘇失敗，請(qǐng)立即留存復(fù)蘇全過程照片，并時(shí)間通知銷售處理。

四、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1.凍存細(xì)胞復(fù)蘇

- 將 1mL 細(xì)胞懸液凍存管置于 37℃水浴，快速搖晃至解凍；

- 加入含 4 - 6mL 培養(yǎng)基的離心管中輕柔混勻；

- 1000RPM 離心 3 - 5 分鐘，棄去上清液；

- 用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種至含 6 - 8mL 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶/皿；

- 37℃培養(yǎng)過夜，次日在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)與密度。

2.對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：（細(xì)胞密度 80% - 90% 可傳代）

- 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1 - 2 次。

- 加入 0.25％（w/v）胰蛋白酶 - 0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（T25 瓶 1 - 2mL，T75 瓶 2 - 3mL），置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 - 2 分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3 - 4ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基來終止消化。

- 輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3 - 5min，棄去上清液，補(bǔ)加 1 - 2mL 培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按 1:2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6 - 8ml 按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按 1:2 - 1:5 的比例進(jìn)行。

3.對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

- 注：次傳代推薦傳代比例為 1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自行決定。

- 方法一：收集細(xì)胞，1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1 - 2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

- 方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

4.細(xì)胞凍存：收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

五、生物安全注意事項(xiàng)

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為具有潛在生物危害性，必須在二級(jí)生物安全柜內(nèi)操作，做好個(gè)人防護(hù)；所有廢液及接觸過細(xì)胞的器皿，需經(jīng)滅菌處理后方可丟棄。

2. 復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)，務(wù)必佩戴防護(hù)手套、防護(hù)服及防護(hù)面罩；凍存管浸沒在液氮中可能發(fā)生泄漏并灌入液氮，解凍時(shí)液氮?dú)饣讓?dǎo)致容器爆裂、瓶蓋崩飛造成人員劃傷等傷害，操作時(shí)務(wù)必謹(jǐn)慎。

人急性髓性嗜酸性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞EOL-1  

人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231+GFP

293T過表達(dá)ACE2細(xì)胞株 293T/ACE2

人乳腺癌細(xì)胞HCC1806

云南宣威肺腺癌細(xì)胞系綠色熒光標(biāo)記XWLC-05+GFP

人胚腎細(xì)胞ProPakA.6

人胎盤細(xì)胞Hs 815.Pl

人急性髓系白血病細(xì)胞SKNO-1

人舌磷癌細(xì)胞CAL33

人食管鱗癌細(xì)胞KYSE-140

人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞帶綠色熒光Caki-2+GFP

人惡性黑色素瘤細(xì)胞MeWo

人膀胱癌細(xì)胞RT112

人胃癌細(xì)胞NUGC-3

人肺支氣管癌細(xì)胞NCI-H1666

人乳腺癌細(xì)胞帶紅色熒光MDA-MB-231+RFP

人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞帶綠色熒光U87 MG+GFP

人食管鱗狀細(xì)胞癌COLO-680N

人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞IHH4

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞帶綠色熒光LS174T+GFP

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞帶熒光素酶LS174T+LUC

人彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞DB

人乳腺癌細(xì)胞SUM149PT

人結(jié)腸直腸腺癌細(xì)胞SW1417

人系膜細(xì)胞UM-Chor1

人肺癌細(xì)胞CAL-12T

人肝癌細(xì)胞SNU368

人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H2286

人胰腺癌細(xì)胞HS 766T

人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞LN-18

人急性髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞OCI-AML3

人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞HBL-1

人B細(xì)胞淋巴瘤OCI-LY19

人B淋巴母細(xì)胞瘤pfeiffer