小鼠肺癌細(xì)胞奧希替尼耐藥株LLC+Osimertinib培養(yǎng)說(shuō)明

簡(jiǎn)介：LLC細(xì)胞是小鼠Lewis肺癌細(xì)胞。

貨號(hào)：WS1134

規(guī)格：1×10? 細(xì)胞/T25 培養(yǎng)瓶

一、細(xì)胞基本信息

- 細(xì)胞來(lái)源：小鼠肺癌組織

- 細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

-傳代比例/細(xì)胞消化：1:2傳代,懸浮部分離心收集(1000RPM,5分鐘)，貼壁部分消化1-3分鐘。

- 倍增時(shí)間：每周2-3次

- 細(xì)胞含量：＞1×10? 細(xì)胞/瓶

- 包裝規(guī)格：T25 培養(yǎng)瓶 / 1mL 凍存管

- 產(chǎn)品用途：僅供科研使用，不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用。

二、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件

1. 培養(yǎng)基

DMEM 培養(yǎng)基；10%胎牛血清； 1μM Osimertinib；1%雙抗

推薦血清：WinSera FBS500 - WP - 002

2. 培養(yǎng)條件

- 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3. 凍存與儲(chǔ)存

- 凍存液：90%胎牛血清 + 10%DMSO（現(xiàn)配現(xiàn)用）

- 儲(chǔ)存條件：液氮長(zhǎng)期保存

備注：收到細(xì)胞后按照下面的要求操作：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的。待細(xì)胞長(zhǎng)到 40-50%的匯合度時(shí)，去掉培養(yǎng)液，加入含0.5μM Osimertinib藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱，這段時(shí)間肯定會(huì)有小部分細(xì)胞懸浮起來(lái)，但是不要緊，通過(guò)換液可以去掉，下面的細(xì)胞待長(zhǎng)滿(mǎn)就可以消化傳瓶了，一兩代之后可以將藥物濃度提高到1μM Osimertinib，含藥培養(yǎng)液用于細(xì)胞培養(yǎng)都沒(méi)問(wèn)題的，凍存的時(shí)候就不要在凍存液里面加藥物了。（注明：用不含藥物培養(yǎng)基培養(yǎng)一周到兩周，再用含藥培養(yǎng)基培養(yǎng)。）如需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)?zhí)崆爸辽?周更換為正常培養(yǎng)基培養(yǎng)。

三、運(yùn)輸形式與接收處理

1. 常溫發(fā)貨（T25 瓶活細(xì)胞）

收到細(xì)胞后，先對(duì) T25 培養(yǎng)瓶瓶身進(jìn)行表面消毒；將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱靜置 2 - 3 小時(shí)；觀察細(xì)胞密度與生長(zhǎng)狀態(tài)，拍攝 2 - 3 張清晰照片反饋給銷(xiāo)售；細(xì)胞密度達(dá)標(biāo)即可進(jìn)行傳代，前期傳代比例建議為 1:2；待細(xì)胞再次長(zhǎng)滿(mǎn)后，將其中一整瓶細(xì)胞凍存為 1 支 1mL 凍存管，另一瓶繼續(xù)傳代；建議反復(fù)凍存 2 - 3 支種子細(xì)胞后，再進(jìn)行擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，避免因突發(fā)情況導(dǎo)致細(xì)胞斷種。

備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用于培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議 T25 培養(yǎng)瓶按 1:2 傳代。

2. 干冰發(fā)貨（凍存管細(xì)胞）

常規(guī)發(fā)貨為 2 支凍存管，建議復(fù)蘇 1 支、留存 1 支備用；若支復(fù)蘇失敗，嚴(yán)格按照廠(chǎng)家標(biāo)準(zhǔn)復(fù)蘇流程操作第二支；若兩支均復(fù)蘇失敗，請(qǐng)立即留存復(fù)蘇全過(guò)程照片，并時(shí)間通知銷(xiāo)售處理。

四、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1.凍存細(xì)胞復(fù)蘇

- 將 1mL 細(xì)胞懸液凍存管置于 37℃水浴，快速搖晃至解凍；

- 加入含 4 - 6mL 培養(yǎng)基的離心管中輕柔混勻；

- 1000RPM 離心 3 - 5 分鐘，棄去上清液；

- 用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種至含 6 - 8mL 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶/皿；

- 37℃培養(yǎng)過(guò)夜，次日在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)與密度。

2.對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：（細(xì)胞密度 80% - 90% 可傳代）

- 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1 - 2 次。

- 加入 0.25％（w/v）胰蛋白酶 - 0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（T25 瓶 1 - 2mL，T75 瓶 2 - 3mL），置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 - 2 分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3 - 4ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

- 輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3 - 5min，棄去上清液，補(bǔ)加 1 - 2mL 培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按 1:2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6 - 8ml 按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按 1:2 - 1:5 的比例進(jìn)行。

3.對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

- 注：次傳代推薦傳代比例為 1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶(hù)需要自行決定。

- 方法一：收集細(xì)胞，1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1 - 2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

- 方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

4.細(xì)胞凍存：收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

五、生物安全注意事項(xiàng)

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為具有潛在生物危害性，必須在二級(jí)生物安全柜內(nèi)操作，做好個(gè)人防護(hù)；所有廢液及接觸過(guò)細(xì)胞的器皿，需經(jīng)滅菌處理后方可丟棄。

2. 復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)，務(wù)必佩戴防護(hù)手套、防護(hù)服及防護(hù)面罩；凍存管浸沒(méi)在液氮中可能發(fā)生泄漏并灌入液氮，解凍時(shí)液氮?dú)饣讓?dǎo)致容器爆裂、瓶蓋崩飛造成人員劃傷等傷害，操作時(shí)務(wù)必謹(jǐn)慎。

人源 WS-S14668 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞順鉑耐藥株PC-9-DDP

人源 WS-S1385 人卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥株COC1+DDP

人源 WS-S1298 人卵巢癌細(xì)胞尼拉帕利SK-OV-3+Niraparib  (STR鑒定正確)

人源 WS-S1260 人結(jié)腸癌耐奧沙利鉑耐藥株HCT-116+Oxaliplatin

人源 WS-S1259 人肺腺癌耐奧希替尼耐藥株NCI-H1975+Osimertinib

人源 WS-S1247 人胃癌紫杉醇耐藥株AGS+Taxol

人源 WS-S1246 人胃癌奧沙利鉑耐藥株AGS+Oxaliplatin

人源 WS-S1245 人結(jié)腸癌耐5氟尿嘧啶耐藥株HCT-116+5-Fluorouracil

人源 WS1134 非洲綠猴腎細(xì)胞耐順鉑VEROC1008(E6)+DDP

人源 WS1133 小鼠肺癌細(xì)胞奧希替尼耐藥株LLC+Osimertinib

人源 WS1069 人非小細(xì)胞肺癌奧希替尼耐藥株HCC-827+Osimertinib

人源 WS1068 人非小細(xì)胞肺癌奧希替尼耐藥株PC-9+Osimertinib

人源 WS1067 人卵巢癌耐紫杉醇耐藥株A2780+Taxol

人源 WS1061 人宮頸癌細(xì)胞順鉑耐藥株C33A+DDP

人源 WS1054 人肝癌亞力山大耐索拉非尼耐藥細(xì)胞PLC/PRF/5+sorafensh

人源 WS1053 人膀胱癌吉西他濱耐藥株5637/G

人源 WS1052 人前列腺癌多西他賽耐藥株DU-145+Docetaxel

人源 WS1051 人宮頸癌紫杉醇耐藥株Hela+Taxol

人源 WS1050 人胰腺癌吉西他濱耐藥株MIA-PACA-2/G

人源 WS1049 人胰腺癌吉西他濱耐藥株SW1990/G

人源 WS1048 人結(jié)腸癌奧沙利鉑耐藥株HCT-8+Oxaliplatin

人源 WS1047 人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株HCT-8+Taxol

人源 WS-Q2009 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞長(zhǎng)春新堿耐藥株HCT-8/V

人源 WS-Q1156 人膀胱癌耐順鉑細(xì)胞株T24+DDP(STR鑒定正確)

人源 WS-Q1155 人卵巢癌順鉑耐藥株A2780+DDP

人源 WS924 肺癌紫杉醇耐藥株A549+Taxol

人源 WS918 人舌鱗癌順鉑耐藥株CAL 27+DDP

人源 WS901 人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株LOVO+5FU

人源 WS900 人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株HCT-15+Taxol

人源 WS844 人結(jié)直腸癌氟尿嘧啶耐藥株HCT-15+5FU

人源 WS816 人大細(xì)胞肺癌順鉑耐藥株NCI-H460/cis

人源 WS810 人卵巢癌腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞OVCAR-8/ADR

人源 WS789 人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥株ASPC-1/GEM

人源 WS761 人卵巢癌順鉑耐藥株SKOV3/DDP

人源 WS721 人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株MCF-7+adr

人源 WS707 人胃癌順鉑耐藥株 AGS/DDP

人源 WS687 人胃癌順鉑耐藥株SGC7901/DDP

人源 WS370 人白血病阿霉素耐藥株K562/ADR

人源 WS338 吉非替尼耐藥PC-9GR

人源 WS107 人肺癌細(xì)胞/5Fu耐藥株A549-5Fu

人源 WS053 人肺腺癌耐順鉑株A549/DDP