HFL1 人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)手冊(cè)

注：本細(xì)胞是有限細(xì)胞系

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞取自正常胎兒的肺成纖維細(xì)胞，核型正常。該細(xì)胞為有限代數(shù)細(xì)胞，是穩(wěn)定的人二倍體細(xì)胞，所以應(yīng)注意不能長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)。據(jù)用戶反饋，收到后在合適的培養(yǎng)條件下，一般能10次以上倍增。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：白人，胎兒

2） 形態(tài)：成纖維樣，貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

蘇州千舍生物實(shí)驗(yàn)室所出售細(xì)胞，均含有STR鑒定報(bào)告，保證細(xì)胞狀態(tài)發(fā)貨~~

一、 細(xì)胞收貨通用流程

1. 檢查包裝

  · 收到細(xì)胞后，立即檢查外包裝及培養(yǎng)瓶有無(wú)破損、漏液。

  · 如有任何異常，立即拍照記錄（包裝和顯微鏡下?tīng)顟B(tài)），并聯(lián)系客服。

2. 顯微鏡下初步觀察

  · 用酒精棉球che底消毒培養(yǎng)瓶表面。

  · 無(wú)需打開(kāi)瓶蓋，直接在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)、密度并檢查是否有微生物污染（如細(xì)菌、真菌）。

  · 拍照記錄不同倍數(shù)下的細(xì)胞形態(tài)和是否有污染，作為售后憑證。

3. 穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)

  · 將整個(gè)培養(yǎng)瓶（瓶蓋擰緊）放入37°C、5% CO?培養(yǎng)箱中，靜置2-3小時(shí)，讓細(xì)胞從運(yùn)輸應(yīng)激中恢復(fù)。

4. 處理決策

  · 靜置后，參照附帶的細(xì)胞操作指南，根據(jù)細(xì)胞密度和狀態(tài)進(jìn)行首次傳代或凍存。

  · 隨貨資料：請(qǐng)核對(duì)并妥善保管細(xì)胞說(shuō)明書(shū)、培養(yǎng)操作指南、細(xì)胞鑒定報(bào)告及支原體檢測(cè)報(bào)告。

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二、 常溫細(xì)胞收貨當(dāng)天處理細(xì)則

di一步：收貨與檢查

· 執(zhí)行di一部分（通用流程） 的第1、2步。

第二步：更換培養(yǎng)基與細(xì)胞收集

· 消毒瓶身后，在超凈工作臺(tái)中打開(kāi)瓶蓋。

· 更換為隨貨贈(zèng)送的完全培養(yǎng)基。

· 特別注意：如果顯微鏡下發(fā)現(xiàn)有較多細(xì)胞懸浮，需將瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至無(wú)菌離心管，離心（如1200rpm, 5min）收集細(xì)胞，棄去舊培養(yǎng)基。

· 完成更換或收集后，將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱繼續(xù)靜置2-3小時(shí)。

第三步：靜置后處理（根據(jù)細(xì)胞密度）

三、 細(xì)胞傳代操作步驟

A. 貼壁細(xì)胞傳代

1. 準(zhǔn)備：吸棄舊培養(yǎng)基。

2. 沖洗：沿培養(yǎng)瓶側(cè)壁緩慢加入PBS等沖洗液，輕輕晃動(dòng)后吸棄，去除殘留血清。

3. 消化：加入預(yù)熱的胰酶（如T25加1ml），輕輕晃動(dòng)使胰酶覆蓋所有細(xì)胞。

4. 孵育：室溫消化約2分鐘（時(shí)間因細(xì)胞而異）。

5. 觀察：在顯微鏡下觀察，直至≥90% 細(xì)胞變圓、脫落。若未達(dá)到，可每30秒檢查一次。

6. 終止：當(dāng)細(xì)胞充分解離后，立即加入兩倍胰酶體積的預(yù)熱的完全培養(yǎng)基終止消化。

7. 吹打：用移液器輕輕吹打瓶壁，使細(xì)胞完全脫落并分散成單細(xì)胞懸液。

8. 離心：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管，200 × g 離心 3-5分鐘，棄上清。

9. 重懸與接種：用少量新鮮完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，按適當(dāng)比例稀釋后，接種到新的培養(yǎng)瓶中。

10. 培養(yǎng)：放入培養(yǎng)箱。若使用普通瓶蓋，務(wù)必旋松瓶蓋以利氣體交換。

B. 懸浮細(xì)胞傳代

1. 收集與離心：將細(xì)胞懸液全部轉(zhuǎn)移至離心管，1000 rpm 離心 5分鐘，棄上清。

2. 重懸：加入1-2ml新鮮完全培養(yǎng)基，輕柔重懸細(xì)胞。

3. 接種：按1:2的比例將細(xì)胞懸液傳至新T25培養(yǎng)瓶，并補(bǔ)充總培養(yǎng)基量至5-8ml。

4. 培養(yǎng)：放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

四、 特殊問(wèn)題處理：運(yùn)輸中脫落的貼壁細(xì)胞

部分貼壁不牢的細(xì)胞在運(yùn)輸中會(huì)脫落，屬正?，F(xiàn)象，按以下步驟處理：

1. 收集：將瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管，離心（1200rpm, 3-5min）棄上清。

2. 清洗：用PBS重懸細(xì)胞，再次離心（1200rpm, 3-5min）棄去PBS。

3. 消化：加入約1ml 0.25%胰酶，輕柔混勻（勿劇烈吹打），放入培養(yǎng)箱消化1-2分鐘。

4. 終止與分散：取出后輕輕吹打使細(xì)胞團(tuán)分散，迅速加入3-5ml完全培養(yǎng)基終止消化，離心（1200rpm, 3-5min）棄上清。

5. 重懸與接種：加入5ml完全培養(yǎng)基重懸，按比例接種到新培養(yǎng)瓶/皿中。

6. 觀察：鏡下觀察。若細(xì)胞為單顆或僅有3-5個(gè)細(xì)胞的小團(tuán)，可正常培養(yǎng)，待其貼壁生長(zhǎng)。--

五、 售后服務(wù)政策摘要

重要提示：任何異常問(wèn)題，盡快拍照并與我們聯(lián)系是獲得售后支持的關(guān)鍵。