TOV-112D 人上皮性卵巢癌細胞培養(yǎng)手冊

蘇州千舍生物實驗室所出售細胞，均含有STR鑒定報告，保證細胞最佳狀態(tài)發(fā)貨~~

規(guī)格： 1*10 6  

該細胞系于 1992 年 10 月從一名42歲女性患有早發(fā)性卵巢癌的患者中啟動。該患者為法裔加拿大血統(tǒng)，卵巢癌家族史不明。與 TOV-21G ( ATCC CRL-11730 ) 和 OV-90 ( ATCC CRL-11732 ) 不同，TOV-112D 細胞系在染色體 3p24 處沒有缺失。

細胞特性

1） 來源：42歲 女性 卵巢癌組織

2） 形態(tài)：上皮樣   貼壁生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備基礎培養(yǎng)基是 1:1 的 MCDB 105 培養(yǎng)基（含最終濃度為 1.5 g/L 碳酸氫鈉）和M199 培養(yǎng)基（含最終濃度為 2.2 g/L 碳酸氫鈉）的混合物，優(yōu)質(zhì)胎牛血清，15%；雙抗，1%。

備注：該細胞生長緩慢，培養(yǎng)周期在3-4周左右。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配

二． 細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mLwan全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mlwan培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的wan全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

細胞培養(yǎng)的原則

無菌原則

1.操作臺環(huán)境無菌：紫外線消毒至少30分鐘，75%酒精擦拭。

2.實驗材料無菌：紫外線照射、酒精擦拭、酒精燈、封口膜。

3.實驗時手部無菌。

4.實驗操作無菌。

減少細胞環(huán)境擾動原則

1.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度恒定，進行操作前培養(yǎng)基預熱。

2.轉(zhuǎn)移細胞時需輕拿輕放、避免震動。

3.縮短細胞在培養(yǎng)箱外的時間，維持恒定的CO2濃度。

4. 槍頭吹打時要輕柔，避免細胞發(fā)生破壞。

小鼠腦神經(jīng)瘤細胞熒光素酶標記 neuro-2a+luc

小鼠胰腺癌細胞熒光素酶標記 panc02+LUC

小鼠單核巨噬細胞白血病細胞+GFP RAW 264.7+GFP

小鼠前列腺癌細胞熒光素酶標記 RM-1+LUC

大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞綠色熒光標記 C6+LUC

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞低分化+GFP PC12低分化+GFP

中國倉鼠卵巢細胞k1 亞克隆系 CHO-K1（懸?。?/span>

鴨胚胎成纖維細胞 Duck embryo

人膽囊上皮細胞永生化

人胰腺癌相關成纖維細胞永生化

人胰腺癌細胞永生化

人膽囊上皮細胞永生化+GFP GFP

C57小鼠巨噬細胞永生化

豬扁桃體上皮細胞永生化

人風濕性關節(jié)滑膜成纖維細胞永生化

豬脂肪干細胞永生化

鴨胚肝間質(zhì)細胞永生化

羊睪丸間質(zhì)細胞永生化

兔肝間質(zhì)細胞永生化

人頸靜脈球瘤細胞永生化

人主動脈內(nèi)皮細胞永生化

山羊乳腺上皮細胞永生化

豬骨骼肌衛(wèi)星細胞永生化

人肝竇內(nèi)皮細胞永生化

人副神經(jīng)節(jié)瘤細胞永生化

人腸息肉上皮細胞永生化

人原代聽神經(jīng)瘤細胞永生化

人原代髓核細胞永生化

人原代神經(jīng)鞘膜瘤細胞永生化

人胰腺腫瘤成纖維細胞永生化

人子宮內(nèi)膜上皮細胞永生化

大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞永生化

小鼠肺成纖維細胞永生化

小鼠胰腺星狀細胞永生化

鴨腦微血管內(nèi)皮細胞永生化

湖羊瘤胃上皮細胞永生化

豬肝星狀細胞永生化

兔肝臟間質(zhì)細胞永生化

豬鼻腔粘膜上皮細胞永生化

小鼠腎小球系膜細胞永生化

小鼠脂肪干細胞永生化

豬子宮內(nèi)膜上皮細胞永生化

人前庭鞘膜瘤細胞永生化

人胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細胞永生化

小鼠附睪脂肪干細胞永生化

小鼠骨髓巨噬細胞永生化

雞胚成纖維細胞永生化

豬主動脈內(nèi)皮細胞永生化

豬小腸上皮細胞永生化

雪貂鼻腔粘膜上皮細胞永生化

人淋巴管內(nèi)皮細胞永生化

人主動脈瓣膜間質(zhì)細胞永生化

人睪丸支持細胞永生化

人骨骼肌細胞永生化

人卵巢癌相關成纖維細胞永生化

人甲狀旁腺細胞永生化

人乳腺上皮細胞永生化

人乳腺癌成纖維細胞永生化

人軟骨細胞永生化

小鼠角膜上皮細胞永生化

小鼠肝星狀細胞永生化

大鼠內(nèi)皮祖細胞永生化

雞氣管黏膜上皮細胞永生化

大鼠毛囊干細胞永生化細胞

人成骨細胞永生化

人雪旺細胞永生化

人脂肪干細胞永生化

大鼠海綿體內(nèi)皮細胞永生化

雞骨骼肌細胞永生化

小鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞永生化

豬皮膚成纖維細胞永生化

小鼠肺動脈平滑肌細胞永生化

小鼠卵巢顆粒細胞永生化

小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞永生化

小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞永生化+GFP GFP

小鼠內(nèi)皮祖細胞永生化

小鼠角膜基質(zhì)細胞永生化

小鼠腸間質(zhì)細胞永生化

人支氣管平滑肌細胞永生化

貓主動脈內(nèi)皮細胞永生化

雞腎小管上皮細胞永生化

大鼠乳腺成纖維細胞永生化